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助力核酸检测¬——新冠专题
源叶生物 / 2021-11-12

 随着秋冬时节来临,新型冠状病毒又掀起了一轮新的传播

 11110—24时,31个省(自治区、直辖市)和新疆生产建设兵团报告新增确诊病例98例。其中境外输入病例19例(上海6例,云南5例,黑龙江2例,广东2例,内蒙古1例,浙江1例,福建1例,广西1例);本土病例79例(辽宁52例,均在大连市;河南12例,其中郑州市6例、周口市6例;北京6例,其中海淀区4例、朝阳区2例;黑龙江5例,均在黑河市;河北2例,均在辛集市;江西1例,在上饶市;云南1例,在德宏傣族景颇族自治州),含16例由无症状感染者转为确诊病例(河南11例,辽宁5例)。

新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 20192019-nCoV),简称“新冠肺炎”目前,对全球公共卫生安全构成了巨大威胁!

什么是病毒?

病毒(virus): 是由一个核酸分子(DNARNA)与蛋白质构成的非细胞形态,靠寄生生活的介于生命体及非生命体之间的有机物种,它既不是生物亦不是非生物,目前不把它归于五界(原核生物、原生生物、真菌、植物和动物)之中。病毒可以感染几乎所有具有细胞结构的生命体。一个保护性外壳包裹的一段DNA或者RNA,借由感染的机制,这些简单的有机体可以利用宿主的细胞系统进行自我复制,但无法独立生长和复制

冠状病毒在系统分类上属套式病毒目(NidoviralesCoronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)。冠状病毒属的病毒是具envelope)、为线性单股正链的,是自然界广泛存在的一大类SARS-CoV-2 [3] [4]  )是目前已知的第7种可以感染人的冠状病毒,其遗传物质为RNA RNARNA之间重组率非常高,病毒出现变异正是由于这种高重组率。

 

检测原理

核酸检测的物质是病毒的核酸。核酸检测是查找患者的呼吸道标本、血液或粪便中是否存在外来入侵的病毒的核酸,来确定是否被新冠病毒感染。因此一旦检测为核酸“阳性”,即可证明患者体内有病毒存在。新冠病毒感染人体之后,首先会在呼吸道系统中进行繁殖,因此可以通过检测痰液、鼻咽拭子中的病毒核酸判断人体是否感染病毒。所以说,核酸检测阳性可以作为新型冠状病毒感染确诊的金标准。

核酸检测( RT -PCR荧光法)是当前检测“新冠肺炎” 的主要方法,其基本原理是:根据病毒的核酸序列设计特异性的引物用于扩增对应的核酸片段,同时高度特异性的TaqMan探针可与对应的核酸片段进行结合,并在Taq酶外切酶活性作用下发生水解,产生荧光信号,根据荧光信号与扩增循环数之间的关系可得到实时扩增曲线。标本处理前必须进行56°C 30min病毒灭活预处理,方可进行后续处理。目前各大商业公司试剂盒中以2019-nCoVRdRP基因(位于ORF 1ab读码框)E基因和N基因为检测对象,从而实现对2019-nCoV核酸的检测。

核酸诊断检测,首先要进行样本采集,病毒采样管是检测流程中最重要的环节之一。病毒采样管的及时供应,也是疫情防控的重要保障。病毒采样管最主要由拭子+采样管+病毒保存液组成。

检测步骤:

病毒保存液一方面直接裂解病毒释放核酸,消除核酸分解酶(RNase)以防止病毒的RNA降解,另外一方面,又能让病毒的蛋白变性,失去活性而“死掉”,不再有传染性,提高运输和检测阶段的安全性。

 

广泛使用的病毒保存液有两种,一种是以运送培养基为基础改良的病毒维持液,另一种则为核酸提取裂解液改良的保存液。

 

病毒保存液中,用量最大的成分是胍盐,核酸提取是指利用物理、化学等方法将核酸从样品中分离出来的过程。分离得到高质量的核酸是分子生物学研究的关键步骤。盐酸胍、异硫氰酸胍和蛋白酶K都具有使蛋白质变性的作用,在核酸提取中有广泛的应用。

盐酸胍,CAS号:50-01-1,是一种白色结晶粉末。盐酸胍是核酸酶的强抑制剂,但并不是强变性剂,它在核酸提取中的主要作用是使蛋白质变性并抑制酶活性。盐酸胍能够快速破坏细胞膜,使得蛋白质变性沉淀,从而让核酸能够摆脱蛋白质的缠绕。盐酸胍的溶解能力和变性能力相对较强,但在酸性条件下易产生沉淀、可能对蛋白质离子交换色谱有干扰等缺点。

 异硫氰酸胍,CAS号:593-84-0,是一种白色结晶性粉末。异硫氰酸胍是一类强力的蛋白质变性剂,无RNA酶和DNA酶活性。在核酸提取中,异硫氰酸胍能够迅速破碎细胞或病毒释放核酸,抑制细胞释放出的核酸酶,保证核酸一级结构的完整性。新型冠状病毒是一种RNA病毒,各种RNA病毒的核酸由于自体降解和生物酶介导的降解,是较难稳定保存的生物分子。而异硫氰酸胍是一类强有力的蛋白质变性剂,且具有无RNA酶和DNA酶活性的特点。采样管中加入异硫氰酸胍能够破坏RNA酶的分子结构,使样本中可能存在的核酸酶失活,起到稳定保存病毒样本的作用。作为核酸裂解液的主要成分,异硫氰酸胍能迅速破碎病毒,使核蛋白与核酸迅速分离,同时抑制释放出的核酸酶活性,保证核酸一级结构的完整性,提高核酸提取效率;

 

目前,源叶生物可以提供主要相关原料如下:

 

新冠病毒检测及研究相关原料

功能

具体产品

裂解RNA,蛋白灭活,促进PCR

  S30260    异硫氰酸胍593-84-0  99%

  S30259    盐酸胍50-01-1AR99%

  S11080    二硫代苏糖醇3483-12-3BR99%

  S15012   十二烷基硫酸钠151-21-3

  S15011 十二烷基肌氨酸钠 137-16-6 试剂级,95%

  S10085  蛋白酶K39450-01-630u/mg

病毒生存需求

 S16001 三羟甲基氨基甲烷 77-86-1 AR99.9%

  R20049  Hanks平衡盐溶液(1×HBSS,含酚红)   

  R20064 Earle's平衡盐溶液(1×EBSS,无钙镁糖酚红)

  S16013 N-(2-羟乙基)哌嗪-N-(2-乙磺酸) 7365-45-9 BR99% HEPES

  R20069 HEPES溶液(1mol/L,pH6.8-8.0,非无菌)   

稳定病毒蛋白

  S11022  D()-无水葡萄糖 50-99-7 AR99%

  MP20001   胎牛血清   100ml 4

  S12012 牛血清白蛋白 9048-46-8 BR98%

  S12018 人血白蛋白 70024-90-7 BR96-99%

  R22760 牛血清白蛋白溶液(20% BSA)

  S12014 牛血清白蛋白(第五组份)9048-46-8BR98%

抑制细菌

  R22049 l 酚红指示剂(6.8-8.0)    

  R20016 青霉素-链霉素混合溶液(100×双抗)   

  S17024 庆大霉素硫酸盐1405-41-0USP级,590u/mg

  R20013 硫酸庆大霉素溶液(Gentamycin Sulfate,50mg/ml)10ml

  R20017 青霉素-链霉素-庆大霉素混合溶液(100×三抗

  S17024 庆大霉素硫酸盐 1405-41-0 USP级,590u/mg

  S17056 多粘菌素B硫酸盐 1405-20-5 USP级,6000IU/mg

金属离子螯合剂

  S30032乙二胺四乙酸二钾盐 二水合物25102-12-9超纯,99%

  S30026乙二胺四乙酸二钠盐6381-92-6AR99%

  S30419 8-羟基喹啉148-24-3AR99.5%(金属离子的络合剂和萃取剂)

沉淀法提取RNA

  S11042 糖原BR,河蚌提取99%

  S18128 核糖核酸(酵母) 63231-63-0

分解RNA

  S10068 核糖核酸酶(牛胰) 9001-99-4 高纯,60u/mg

荧光检测

  S10118 Taq 9012-90-2 BR2-5u/ul99%

 

更多详情详见官网:skylamac.com

 

源叶生物友情提示:时刻警惕,积极防护,戴口罩,勤洗手。

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